página principal Hibridación in situ con fluorescencia
(FISH: Fluorescent In Situ Hybridization)

Estas páginas son traducción de  
El autor del contenido original es Dave McDonald y las imágenes de ejemplo fueron cedidas por Dynagene Cytogenetics Laboratory (Seattle, WA, U.S.A.)
Traducción al español de Angel Herráez (Univ. de Alcalá)
página actualizada en junio de 2002 y revisada en diciembre de 2014

La FISH es una tecnología que utiliza sondas de DNA marcadas con un fluoróforo para detectar o confirmar anomalías génicas o cromosómicas que generalmente están más allá de la capacidad de resolución de la citogenética de rutina. En primer lugar, la muestra de DNA (cromosomas metafásicos o núcleos en interfase) se desnaturaliza, proceso que separa las hebras complementarias de la estructura bicatenaria en doble hélice del DNA. A la muestra desnaturalizada se le añade entonces la sonda de interés, que se asociará al DNA de la muestra en el sitio diana, en el proceso denominado hibridación, donde se vuelve a formar una doble hélice. La sonda está unida covalentemente (marcada) con un fluoróforo, que emite una señal observable mediante un microscopio de fluorescencia; así la muestra de DNA se puede clasificar según la presencia o ausencia de la señal, lo que desvela la presencia o ausencia de la secuencia diana en el DNA cromosómico.

FISH de metafase

La FISH puede usarse sobre células en metafase para detectar microdeleciones específicas más allá de la capacidad de resolución de la citogenética de rutina, o para identificar material extra de origen desconocido. Puede también ser de ayuda en casos donde es difícil determinar mediante la citogenética de rutina si un cromosoma tiene una deleción simple o si está implicado en una reorganización sutil o compleja. Además, la FISH de metafase puede detectar algunos de los reordenamientos específicos que se observan en ciertos tipos de cáncer.

El número de síndromes de microdeleción diagnosticados por FISH está aumentando con rapidez. La sensibilidad de estos ensayos es en todos los casos mejor que la de la citogenética de rutina, pero depende del síndrome en concreto. En algunos, la sonda es específica para el gen defectuoso, como en el síndrome de Williams, donde el 96% de los pacientes con diagnóstico confirmado poseen una deleción en el gen de la elastina. En otros síndromes como el de Prader-Willi/Angelman, la etiología es heterogénea y las microdeleciones sólo existen en una parte de los casos (60%).

Algunos síndromes de microdeleción diagnosticables mediante FISH

  • Síndrome del maullido (cri-du-chat)
  • Síndrome de Kallman
  • Síndrome de Miller-Dieker
  • Síndrome de Williams
  • Síndrome de Smith-Magenis
  • Síndrome de Wolf-Hirschhorn
  • Deficiencia de esteroide-sulfatasa
  • Síndrome de Prader-Willi/Angelman
  • Síndrome de DiGeorge, velocardiofacial (VCFS), CATCH 22 o de Shprintzen

FISH de interfase

La FISH se puede usar sobre células en interfase para determinar el número de copias de uno o varios cromosomas, así como para detectar algunas reorganizaciones específicas que son características de ciertos tipos de cáncer. La ventaja principal de la FISH de interfase es que se puede realizar muy rápidamente si es preciso, normalmente en 24 horas, porque no requiere cultivo para la proliferación de las células.

Un buen ejemplo es el ensayo de aneuploidía, que se realiza sobre células del fluido amniótico cuando hay una fuerte indicación clínica de una de las trisomías más comunes. Se desnaturalizan los núcleos de la muestra, se hibridan con sondas específicas para los cromosomas 13, 18, 21, X e Y, y los resultados están disponibles habitualmente en 24 horas. La prueba de aneuploidía suele incluir también una citogenética de rutina para confirmar los resultados o detectar cualquier anomalía no detectada por la FISH de interfase.

Ejemplos de FISH

Pulse en los enlaces siguientes para ver algunos ejemplos de FISH detectados en el laboratorio de Dynacare:



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