12.3 Rigor en la hibridación

Muestra de DNA		Sonda bicatenaria monocatenaria
Fragmentación con enzimas de restricción Desnaturalización (aumento de temperatura, etc.)		Sonda monocatenaria Sonda bicatenaria Desnaturalización (aumento de temperatura, etc.)
Mezcla
Hibridación en condiciones muy rigurosas temperatura alta (p.ej. 42 °C), concentración alta de formamida, concentración baja de NaCl		Hibridación en condiciones poco rigurosas temperatura baja (p.ej. 35 °C), concentración baja de formamida, concentración alta de NaCl
sólo son estables los híbridos con complementariedad de secuencias perfecta sólo son estables los híbridos con complementariedad de secuencias perfecta		se permiten híbridos con complementariedad de secuencias imperfecta se permiten híbridos con complementariedad de secuencias imperfecta

Recuerde el efecto de la formamida y las sales sobre la capacidad de reasociación de las hebras de ácido nucleico: pág. 163 y cálculo de la temperatura de fusión.