Problemas de cromatografía
de proteínas

Problema 1

¿Cuál de los siguientes tipos de cromatografía será más adecuado para separar los compuestos A y B componentes de cada muestra?  

Cromatografía:

1. En capa fina de celulosa con cloroformo/metanol/acético (1:1:0,1) como fase móvil
2. En columna de Sephadex G-50 con tampón fosfato pH=7 como fase móvil
3. En columna de DEAE-Sepharosa con un gradiente de NaCl como fase móvil
4. En papel con tampón fosfato pH=4 como fase móvil
5. En columna de proteína A-Sepharosa con un gradiente de pH 7,5 a 1,5 como fase móvil
6. En columna de octil-Sepharosa con tampón fosfato pH=7 como fase móvil
7. En columna de piruvato ligado a BioGel-P20 con un gradiente de NaCl como fase móvil
8. En columna de gel de sílice con hexano/éter/acético (60:40:1) como fase móvil

Respuesta:

Problema 2

Disponemos de microesferas de polietileno con grupos sulfónico unidos covalentemente. ¿Para qué tipo de cromatografía podremos utilizarlas (como fase estacionaria)?

(a) de exclusión; (b) de intercambio aniónico; (c) de intercambio catiónico; (d) de reparto

Respuesta:

Problema 3

La casa GE Lifesciences vende, para cromatografía de filtración en gel, el producto Sephadex G-100 Superfine, con las siguientes características:

Una muestra contiene las proteínas indicadas a continuación. Razonar cuál(es) de los componentes se podrá(n) separar en una columna rellena con Sephadex G-100.

Lactoferrina: 77 kDa, pI=8,8
Proteína ligante de retinol (RBP): 21 kDa, pI=4,6
Lisozima: 15 kDa, pI=10,5
Ceruloplasmina: 134 kDa, pI=4,4
Glutatión: 333 Da, pI=2,25

Respuesta:

Problema 4

Resuelve el problema anterior empleando como medio cromatográfico Sephadex G-75.

Los datos necesarios pueden encontrarse en el catálogo de GE Life Sciences o en http://www.gelifesciences.com/

Respuesta:

Problema 5

A partir de un antisuero se pretende purificar un anticuerpo anti-insulina, empleando cromatografía de afinidad en una columna rellena con Biogel-A al que se ha unido insulina de forma covalente a través de un grupo espaciador de 6 carbonos.

Elegir de entre las fases móviles siguientes las más adecuadas para la etapa de lavado tras la muestra y para la elución de lo retenido en la columna.

1. Mezcla cloroformo/metanol 2:1
2. Alcohol isopropílico
3. NaCl 0.9%
4. Tampón bicarbonato sódico pH=10
5. 0.5 mg/ml de [¹²⁵I]-insulina en tampón fosfato pH=7.4
6. 2 mg/ml de glucagón en NaCl 0.9%
7. 2 mg/ml de IgG anti-insulina en tampón fosfato pH=7

Respuesta:

Problema 6

Una de las aplicaciones frecuentes de la cromatografía de exclusión molecular es la determinación de la masa molecular de proteínas globulares. Para ello, es preciso disponer de proteínas patrón de masa conocida.
Tras un proceso de purificación que partió de un extracto celular, el cromatograma de exclusión obtenido con la muestra resultante indicó la presencia de 2 proteínas diferentes. Calcule cuál es su masa molecular, a partir de los datos de volumen de elución obtenidos con la mezcla de proteínas patrón cromatografiada bajo las mismas condiciones.

Cromatograma de la muestra:

Cromatograma y datos de la mezcla de proteínas patrón: proteína masa molecular Ve aldolasa 39.2 kDa 24.0 mL seroalbúmina 66.2 kDa 21.3 mL fosforilasa b 97.0 kDa 18.0 mL β-galactosidasa 116.0 kDa 16.5 mL miosina 212.0 kDa 14.0 mL

Respuesta: