Ensayo de viabilidad celular (integridad de la membrana) mediante exclusión del colorante azul tripano
Preparación de células teñidas con azul tripano. Las células que no captan el colorante (flecha negra) son las que tienen intacta su membrana (vivas); las que se tiñen de azul (flecha amarilla) son las que tienen la membrana dañada (muertas).
Se mezcla un volumen de suspensión celular con uno igual de disolución de azul tripano (de 2 a 4 g/ℓ), se aplica la mezcla al hemocitómetro y se examina al microscopio.
Deben contarse en paralelo las células teñidas de azul y las no teñidas.
El tamaño de la molécula y, en especial, su carga eléctrica impiden que atraviese la membrana celular.
Cáculo de la viabilidad celular de la muestra:
siendo Nv el recuento de células "vivas" (es decir, que excluyen el colorante) y Nm el de células "muertas" (teñidas de azul),
calculamos la viabilidad como Nv / ( Nv + Nm ) y expresaremos esa fracción como porcentaje
Ejemplo y ejercicio
Sobre
cuenta las células teñidas de azul y las no teñidas y calcula la viabilidad (%) de la muestra.
¿Cómo contar las células que tocan los bordes de un recuadro?
Para evitar ignorarlas o contarlas dos veces, en cada recuadro se cuentan las que tocan dos de los lados, siempre los mismos, y se ignoran las que tocan los otros dos.
Por ejemplo, se cuentan las que tocan los lados izquierdo o superior:
en el cuadro 1, se contarán las verdes pero no las moradas.
