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Ensayos de unión de ligandos

Ejercicio de ejemplo:
unión de colchicina a tubulina (ensayo de saturación)

Este ejemplo se describe en la página de apuntes, y debes ser capaz de completarlo siguiendo las instrucciones allí proporcionadas. En última instancia, puedes consultar el ejercicio resuelto.

Tabla para completar con datos y cálculos

Puedes rellenar los datos aquí mismo o, si prefieres imprimirla antes y trabajar sobre el papel, utiliza el archivo pdf.

Los subíndices 1 y 2 hacen referencia a las dos medidas realizadas. RT y RB representan la radiactividad total y la unida, respectivamente.

tubo V RB1 RB2 N T RT B1 B2 F1 F2 B1/F1 B2/F2
(mL) (cpm) (cpm) (pmol) (pM) (cpm) (pM) (pM) (pM) (pM)    
(datos experimentales) = 0.2 × {V} = {N} /
2.5 10−4
= {T} ×
18.315
= {RB} / 18315 = T−B    

Representación gráfica y regresión

Traza la gráfica de la curva de saturación (colchicina unida frente a total, colchicina unida frente a libre) y la de Scatchard.

Ajusta, si te es posible, la curva de saturación a una ecuación de hipérbola (regresión no lineal). En su defecto, ajusta la gráfica de Scatchard a una recta (regresión lineal).

Resultados

Constante de afinidad de la colchicina por la tubulina: ....

Concentración de sitios de unión en la tubulina: ....