10.9 Fundamento del uso de timidina tritiada y bromodesoxiuridina en ensayos de proliferación

Ensayos de proliferación

Para realizar un seguimiento experimental de la viabilidad de células en cultivo en términos de proliferación celular —o capacidad para dividirse— a menudo se añade al medio de cultivo timidina tritiada, es decir, marcada isotópicamente con tritio. La incorporación de la marca a las células refleja el uso de la timidina, lo que quiere decir la síntesis de DNA (a partir de dTTP, entre los otros nucleótidos). La detección en este ensayo de proliferación pasa, obviamente, por la medida de la radiactividad fijada en las células.

Como alternativa que evita el uso de material radiactivo se ha desarrollado el empleo de bromodesoxiuridina (BrdU) en lugar de la timidina. Como se muestra más abajo, el tamaño del átomo de bromo es similar al del grupo metilo, por lo que el 5-bromodesoxiuracilo es un análogo estructural de la timina (5-metiluracilo), y la BrdU lo es de la timidina. Las DNA polimerasas pueden utilizar el trifosfato de BrdU como si fuera dTTP e incorporarlo así al DNA sintetizado. Además, el bromouracilo se empareja con adenina en la otra hebra del mismo modo que lo hace la timina. El bromouracilo, siendo un grupo singular ausente de las células en circunstancias normales, puede detectarse —una vez incorporado al DNA— gracias a que se han desarrollado anticuerpos específicos para BrdU. Dicho anticuerpo va generalmente marcado con un fluorocromo, lo que permite su detección y cuantificación mediante inmunofluorescencia o bien citometría de flujo.

Similitud estructural de la bromodesoxiuridina con la timidina

desoxitimidina-5'-P		5-bromodesoxiuridina-5'-P

Veamos ahora un fragmento de DNA bicatenario al que se ha incorporado un residuo de BrdU en lugar de dT:

Ade   Gua Thy   Cyt BrUra Mostrar: