Separación de pigmentos vegetales empleando cromatografía en capa fina.
Experimento virtual.

Para familiarizarte con la técnica en un laboratorio real, puedes ver este vídeo

Realización del ensayo:

alternar sonido

Etapa 1

Etapa 2

Etapa 3

foto

Este experimento puede realizarse con dos tipos de muestras. Elige uno de ellos:

Las muestras (F1 y F2) son dos fracciones obtenidas a partir de un extracto vegetal empleando una cromatografía en columna*; el objetivo es analizar su composición.
El código para las muestras en esta ocasión particular es
Las muestras (nos 1 y 2) son extractos obtenidos de distintas especies vegetales.
El código para las muestras en esta ocasión particular es

Para la identificación se dispone de 5 patrones de pigmentos puros, disueltos en acetona:

Etapas del experimento

1: Se aplican muestras y patrones a la placa recubierta con gel de sílice (fase estacionaria de la cromatografía)

2: La placa se introduce en la cubeta que contiene fase móvil (mezcla de disolventes: hexano, acetona y cloroformo en proporciones 3:1:1), se tapa y se espera a que la fase móvil ascienda; se detiene pasando a la etapa 3.

3: Se saca la placa, se espera a que se evapore el disolvente y se estudian los resultados.

Instrucciones

  1. Para mover el capilar, tómalo por su parte inferior con el puntero del ratón.
  2. Arrastra el capilar a uno de los tubos con muestra o patrón.
  3. Arrastra el capilar hacia la placa de fase estacionaria, colocando su extremo inferior sobre una de las posiciones de aplicación (a, b, c, d, e, f), a la altura de las líneas laterales de referencia.
  4. Arrastra el capilar al contenedor de residuos (luego aparecerá uno nuevo a la izquierda)
  5. Repite el proceso con la otra muestra y con los 5 patrones, aplicando cada uno en una posición diferente. Anota lo que has aplicado en cada una de las 7 posiciones de la placa.
    Puedes aplicar muestras y patrones en cualquier orden y cualquier posición.
  6. Pulsa en el botón ▶ para pasar a la etapa siguiente (nº2), donde se desarrollará la cromatografía de modo automático.
  7. Antes de que la fase móvil llegue arriba, pulsa en el botón ▶ para sacar la placa pasando a la etapa siguiente (nº3).
  8. Observa e interpreta el resultado.
  9. Puedes pulsar en la cámara de fotos para capturar una imagen que se puede copiar o guardar usando el menú contextual del navegador (la foto incluye además el código del experimento, la fecha y la hora).

En tu cuaderno de laboratorio: anota el código asignado a tu experimento y qué has aplicado en cada una de las posiciones de la placa. Añade la foto del resultado. Justifica la distinta movilidad de cada patrón en relación con su estructura. Comparando el resultado de las muestras con los patrones, explica qué tipos de pigmento contiene cada una de las muestras.

Muestras

* El extracto original que se sometió a cromatografía procedía de espinaca, acelga o microalgas, y se aplicó a una columna rellena con alúmina activada. La fracción cromatográfica nº1 fue el resultado de la elución con hexano; la fracción nº2 se obtuvo al eluir después con acetona.

Autor: Angel Herráez. Parte de la sede web Biomodel.uah.es

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Basado en datos de Rf de C. Reiss (1994) Experiments in Plant Physiology. Prentice Hall. ISBN 0137012853, citados por Josep Tarragó-Celada y Josep Mª Fernández Novell (2019) Colour, chlorophyll and chromatography. Science in School 47:41-45.