Problemas de electroforesis

Problema 1

En una electroforesis de alto voltaje en papel a pH=4,0 ¿qué aminoácidos de la relación siguiente migrarán hacia el ánodo y cuáles hacia el cátodo?:
Gly, Cys, Asp, Lys, His

¿En qué orden quedarán distribuidos? 

Respuesta:

Problema 2

Se ha purificado extensivamente una enzima, resultando pura según diversos criterios: un solo pico por cromatografía, electroforesis y sedimentación, en diferentes condiciones. En cambio, al someterla a electroforesis en gel con SDS se obtienen dos bandas, una de doble intensidad que la otra. ¿Qué información se puede deducir acerca de la enzima? ¿Podría verificarse esa hipótesis empleando cromatografía de exclusión?

Respuesta:

Problema 3

Un virus contiene 256 proteínas, de las cuales 64 tienen una masa molecular de 1800 y las 192 restantes de 26000. Se disocia por completo el virus y se analizan sus componentes por electroforesis SDS-PAGE. Dibuje un esquema del resultado esperado, indicando la posición e identidad de las bandas proteicas y su intensidad relativa.

Respuesta:

Problema 4

Se ha determinado la movilidad relativa de la lactato deshidrogenasa y de varias proteínas patrón en electroforesis en gel de poliacrilamida al 7,5% en presencia de SDS, obteniéndose los valores de la tabla. Calcule la masa molecular estimada de la LDH.  

Respuesta:

Problema 5

Se quiere separar una mezcla de las hemoglobinas HbA, HbS y HbC. Sabiendo que donde la hemoglobina normal adulta, HbA, tiene un residuo de Glu la HbS tiene Val y la HbC tiene Lys, razone qué medio utilizaría para realizar la electroforesis en gel: un tampón borato de pH=3.5 o un tampón carbonato de pH=8.5.

Dibuje un esquema con la posición de las bandas resultantes.

Respuesta:

Problema 6

El sistema enzimático lactato deshidrogenasa de vertebrados puede separarse mediante electroforesis en 5 fracciones con actividad enzimática, denominadas isoenzimas. Éstas son consecuencia de la combinación de 2 tipos de subunidades, H y L. Cada órgano y tejido de un animal posee una proporción característica de cada isoenzima. La distribución de las isoenzimas de suero humano se utiliza en bioquímica clínica para el diagnóstico de varias enfermedades: mientras en el suero normal predomina LDH-2, seguida de LDH-3, LDH-1, LDH-4 y LDH-5, tras un infarto de miocardio aumenta en suero la isoenzima 1 (la predominante en el corazón) y en la necrosis hepática aumenta la isoenzima 5 (la predominante en el hígado).

En un laboratorio clínico se han obtenido los siguientes resultados mediante la densitometría de las bandas correspondientes a las isoenzimas una vez revelados los geles:

Calcule la proporción relativa de cada una de las isoenzimas en cada paciente e indique aquéllas con posibles anomalías hepáticas o cardiacas.

Respuesta:

Problema 7

La electroforesis de una enzima a la que previamente se ha tratado con SDS y beta-mercaptoetanol, en gel de poliacrilamida con SDS, da 2 bandas con una movilidad relativa de 0,51 y 0,56. La masa molecular de la enzima nativa, determinada mediante Sephadex G-200 y ultracentrifugación, es de 130 000. Indique la estructura cuaternaria de la enzima y la masa molecular de sus subunidades.

La movilidad relativa de proteínas patrón en las mismas condiciones es:

Respuesta:

Problema 8

La migración de RNA en geles de poliacrilamida se ha comprobado que es inversamente proporcional a su masa molecular, lo que se ha utilizado para el cálculo de ésta. La representación del logaritmo de la masa molecular frente a la distancia migrada da una línea recta para un intervalo adecuado de tamaños. Se ha realizado la electroforesis de RNA del fago T5 de E. coli, en un gel de poliacrilamida del 10%, empleando como patrones RNAs de masa conocida y obteniendo los siguientes resultados:

Calcule la masa molecular de los dos tipos de RNA del fago, sabiendo que migran 4.3 y 2.4 cm en las mismas condiciones que los patrones anteriores.

Respuesta: