Citotoxicidad del peróxido de hidrógeno:
Tratamiento de la línea celular tumoral prostática PC3 con H2O2
y valoración de la actividad metabólica.

1ª parte: Preparación de las disoluciones de peróxido de hidrógeno

Usando como diluyente el medio de cultivo celular, prepara disoluciones de H2O2 de concentraciones mM. Para el experimento se necesitarán al menos 1.5 mL de cada una.

Material:

Procedimiento:

Cada disolución se debe preparar por dilución de la anterior, de forma que su concentración sea la deseada y que haya suficiente cantidad para preparar la siguiente y para emplear en el experimento tres alícuotas de 500 µL cada una (y que sobre algo más).

concentración deseada: mM
volumen de la disolución anterior: µL
volumen de medio de cultivo: µL

Haz tus cálculos, rellena las casillas y si son correctos.

2ª parte: Ensayo del MTT (viabilidad metabólica)

Fundamento

Material:

Tratamientos:


Procedimiento:

  1. Para comenzar, el medio de cultivo de los pocillos (basta con volcar la placa y escurrir bien el líquido).
  2. Añade a cada pocillo 500 µL de una de las disoluciones de tratamiento: H2O2, SDS o medio, de acuerdo con la distribución planificada.
  3. durante 30 minutos en la estufa de cultivos celulares (5% CO2, 95% aire, 90% humedad, 37°C).
  4. el contenido de los pocillos.
  5. Añade a cada uno 500 µL de la disolución de MTT.
  6. durante 2 h para que tenga lugar la reacción de reducción del MTT.
  7. el contenido de los pocillos.
  8. Añade a cada uno 500 µL de DMSO, que disolverá el formazano coloreado.
  9. la absorbancia a 570 nm en el lector de placas.
  10. Copia los resultados y prepara a partir de ellos una gráfica representando el % de viabilidad frente a la concentración de H2O2 del tratamiento (usa escala logarítmica para la concentración).

Laboratorio:

alternar sonido
MTT DMSO
Autor: Angel Herráez. Parte de la sede web Biomodel.uah.es

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